同时购买 1 支总蛋白抗体和 1 支 PTM 抗体,即可获得 1 份价值高达 1999 元的免费抗体或试剂。 | 点击此处 >>
34470
4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjugate)
偶联抗体

4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjugate) #34470

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
H M R Mk 内源性 兔 IgG
流式细胞术

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(红色)作为对照,使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjugate)(蓝色)对 293T 细胞进行流式细胞分析。

了解更多有关我们如何获得图像的信息。

针对需甲醇通透的直标抗体的实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS):(#9808) 要配制 1 L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 到 950 ml dH2O 中,混合均匀。
  2. 16‭‬% 甲醛(无甲醇)
  3. 100% 甲醇
  4. 孵育缓冲液:将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解于 100 ml 1X PBS 中。储存在 4°C。

B. 固定

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

  1. 通过离心收集细胞并吸除上清液。
  2. 在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。添加甲醛并使其终浓度为 4% 。
  3. 在室温下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上孵育 30 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的直标抗体(按照建议的稀释度在孵育缓冲液中制备)中重悬细胞。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 通过离心分离,用孵育缓冲液洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞并用流式细胞分析仪进行分析;或者,如要进行 DNA 染色,那么继续进行可选的 DNA 染色(参见 E 部分)。

E. 可选 DNA 染料

  1. 在 0.5 ml 的 DNA 染料(例如 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087)中重悬细胞。
  2. 室温孵育至少 5 分钟。
  3. 用流式细胞术分析 DNA 染色液中的细胞。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2017 年 6 月

实验步骤编号:407

应用 稀释度
流式细胞术 1:50
存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjugate) 可检测内源水平的 4E-BP1 总蛋白。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠, 猴

使用与人 4E-BP1 Ser112 周围的残基相对应的合成肽对兔子进行免疫接种来产生 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb。

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb #9644 相同。

翻译抑制蛋白 4E-BP1(也称为 PHAS-1)可通过结合翻译起始因子 eIF4E 抑制帽子结构依赖性翻译。4E-BP1 的高度磷酸化会扰乱这种相互作用,进而导致帽子结构依赖性翻译被激活 (1)。PI3 激酶/Akt 通路和 FRAP/mTOR 激酶均可调节 4E-BP1 活性 (2,3)。多个 4E-BP1 残基在体内被磷酸化 (4)。一般认为FRAP/mTOR 在 Thr37 和 Thr46 的磷酸化虽然不会阻碍 4E-BP1 与 eIF4E的结合,但会引导4E-BP1 后续在 Ser65 和 Thr70 的磷酸化 (5)。

  1. Pause, A. et al. (1994) Nature 371, 762-7.
  2. Brunn, G.J. et al. (1997) Science 277, 99-101.
  3. Gingras, A.C. et al. (1998) Genes Dev 12, 502-13.
  4. Fadden, P. et al. (1997) J Biol Chem 272, 10240-7.
  5. Gingras, A.C. et al. (1999) Genes Dev 13, 1422-37.
Entrez-Gene Id
1978
Swiss-Prot Acc.
Q13541
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

上游 / 下游

通路图

探索与本品相关的通路。

购买 # 34470S

查看 数量
产品货号 规格 价格 库存
34470S
100 µl (50 次测试)

中国分公司 (PRC)

赛信通(上海)生物试剂有限公司

上海浦东新区

盛夏路 399 号

亚芯科技园 7 号楼

201210​

中国

电话:
+86-21-58356288
传真:
+86-21-58356116
电话:
4006-473287/GreatQ [免费电话]
电子邮件:
info@cst-c.com.cn
网址:
www.cst-c.com.cn

需要不同国家或地区的信息?请点击此处

如需获得有关本品的当地订购信息,请点击此处

Powered By OneLink