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12856
PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout)
ELISA 试剂盒
抗体阵列试剂盒

PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856

引用 (1)

图 1. PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856 的靶标图。

图 2. HT-29 细胞生长融合至 80%,随后未经处理(左小图)或用紫外线辐射,并恢复 60 分钟(右小图)。细胞提取物制备后使用 PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856 进行分析。通过将玻片稍微暴露在标准化学发光胶片下来捕获图像。

图 3. HeLa 细胞生长融合至 90%,随后未经处理(左小图)或用 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 处理(100 ng/ml,20 分钟;右小图)。细胞提取物制备后使用 PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856 进行分析。通过将玻片稍微暴露在标准化学发光胶片下来捕获图像。

图 4. HeLa 细胞生长融合至 90%,随后用血清饥饿过夜。细胞未经处理(左小图)或用 Human Transforming Growth Factor β3 (hTGF-β3) #8425 处理(100 ng/ml,20 分钟;右小图)。细胞提取物制备后使用 PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856 进行分析。通过将玻片稍微暴露在标准化学发光胶片下来捕获图像。

图 5. HeLa 细胞生长融合至 90%,随后未经处理(左小图)或用 Staurosporine #9953 处理(1 μM,3.5 小时;右小图)。细胞提取物制备后使用 PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) #12856 进行分析。通过将玻片稍微暴露在标准化学发光胶片下来捕获图像。

产品说明

使用 PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) 时将玻片用作平坦表面,利用夹心免疫分析原理。该芯片试剂盒可用于同时检测 19 种参与调控应激反应和凋亡的信号转导分子。靶标特异性捕获抗体按复孔转移到硝化纤维包被的玻片上成为印迹。每个试剂盒包含的两块玻片可在一个实验中用于检测 32 份不同样品,并产生 608 个数据点。细胞裂解物在玻片上孵育,随后使用生物素化的检测抗体混合物进行孵育。随后使用 Streptavidin-conjugated HRP 和 LumiGLO® 试剂通过化学发光的方式使结合的检测抗体变得可视化。使用数字显影系统或标准化学发光胶片可捕获玻片图像。图像可进行视觉分析,或印迹强度使用芯片分析软件进行定量。

保存

试剂盒应保存在 4°C 下,但裂解缓冲液应保存在 -20°C 下(单独包装)。

特异性/敏感性

PathScan® Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit (Chemiluminescent Readout) 可检测芯片靶标图上规定的靶蛋白。靶标之间未观察到实质性的交叉反应性。该试剂盒经优化后可用于稀释至总蛋白浓度介于 0.2 和 1 mg/ml 之间的细胞裂解物(见试剂盒实验步骤)。

背景

营养不足、无法产生或存储代谢功能所需的能量或会导致不能修补损伤的有害环境等许多情况均会导致细胞死亡。在进入促凋亡或抗凋亡通路前,细胞会整合各种来源的多种信号。这些信号通常会携带矛盾信息。通过监测许多关键信号转导组分的变化可评价细胞群中这些进程的净影响。Caspase-3 和 caspase-7 蛋白酶会通过裂解活化许多细胞靶标来发挥促凋亡功能。在 Asp175 和 Asp198 位点的裂解活化会激活 Caspase-3 和 caspase-7。PARP 是一种 DNA 修复和凋亡酶,caspase-3 或 caspase-7 在 Asp214 的裂解活化会使之失活。HSP27 是一种细胞应激介导物,会对不良环境条件产生抗性。Ser82 磷酸化会激活 HSP27。Chk1 和 Chk2 激酶在 ATM/ATR 的下游发挥作用,并在 DNA 损伤检查点调控中起到重要作用。Chk1 和 Chk2 的激活分别涉及 Ser345 和 Thr68 磷酸化。抑癌基因 p53 在细胞对 DNA 损伤的反应中发挥重要作用。p53 在 Ser15 位点被 ATM/ATR 或 DNA-PK 磷酸化,导致它发生聚集。Smad2 是 TGF-β 信号转导的一个关键介导物。TGF-β 刺激会导致 Smad2 在 Ser465/467 位点被磷酸化,并使 Smad2 转位到胞核。TGF-β 信号转导的结果对环境具有依赖性,并且会诱导凋亡或导致肿瘤细胞转移。蛋白酶体介导的 IκBα 降解会使 NF-κB/Rel 被激活。通过 IκBα Ser32 和 Ser36 磷酸化,抑制因子 IκBα 被靶向到蛋白酶体。炎性细胞因子、生长因子和趋化因子会促进各种胞外信号,从而诱导 NF-κB 激活。TAK1 是一种激酶,TGF-β、骨形态发生蛋白和其他细胞因子均会激活它。激活的 TAK1 会磷酸化 MKK4、MKK3/6 和 NIK。TAK1 Ser412 磷酸化是调控其激活水平的一个机制。病毒感染、内质网应激和氨基酸缺乏等细胞应激均会导致 eIF2α 磷酸化。在细胞应激的刺激下,eIF2α在Ser51位点的磷酸化会导致蛋白质合成减少。ERK1 和 ERK2 MAP 激酶是主要的信号转导节点,它们有许多底物,主要转递生长和增殖信号。在 Thr202 和 Tyr204 的双重磷酸化会激活 ERK MAP 激酶。在促炎性细胞因子和基因毒应激的刺激下,类似的双重磷酸化机制会激活 p38 MAPK 和 SAPK/JNK MAP 激酶。Akt 通过生长因子受体刺激被激活,并且主要通过靶向其众多底物来促进合成代谢生长和存活信号的产生。Akt 磷酸化 Bad Ser136,并抑制它诱导凋亡的能力。生存素是一种抗凋亡蛋白,在胚胎发育和癌细胞恶化期间高度表达。生存素结合并抑制 caspase-3,从而通过抑制凋亡并促进细胞分裂来调控细胞周期。α-微管蛋白是一种在所有真核细胞中都存在的微管基本结构。球状 α-微管蛋白的水平被认为是相对恒定的。因此,评估 α-微管蛋白的相对水平可帮助对各种样品进行信号标准化。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PathScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
LumiGLO 是 Kirkegaard & Perry Laboratories 的注册商标。

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