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PTMScan® 蛋白质组技术视频教程

PTMScan® 技术 – 一种用于检测和定量翻译后修饰变化的蛋白质组方法

Jeffrey C. Silva, Charles L. Farnsworth, Xiaoying Jia, Matthew P. Stokes, Albrecht Moritz, Ailan Guo, Roberto D. Polakiewicz, Michael J. Comb, Site Discovery Group and PhosphoScan Services Group, Cell Signaling Technology, Inc.

Cell Signaling Technology (CST) 的 PTMScan® 技术结合用于通过使用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 进行抗体肽富集的专有方法,可对磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 等翻译后修饰 (PTM) 进行定量分析。

PTMScan® 技术利用 CST™ 基序抗体来从已消化的细胞提取物的未修饰肽中分离出翻译后修饰肽的预定义基团。通过结合 LC-MS/MS,这种免疫亲和纯化技术可检测和定量修饰肽丰度变化。基序抗体会特异性结合磷酸化(酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸)肽、乙酰化肽或泛素标记肽,从而对细胞磷酸化、乙酰化或泛素化状态进行定量分析。

MAPK、mTOR 和 PI3K/Akt 通路是致癌基因受体酪氨酸激酶 (RTK) 已激活的下游关键信号转导通路。所有这些通路会激活 AGC 激酶家族成员,包括 Akt、RSK 和 p70 S6 激酶,它们的蛋白质底物在 RxRxxS/T 基序上被磷酸化。

在一项由 CST 科学家所著的最新磷酸化蛋白质组研究 (Sci. Signal. (2010) 24;3(136):ra64) 中,在三种细胞系中检测到超过 300 种 AGC 家族激酶假定底物,每种底物由 EGFR、c-Met 或 PDGFR 诱导。这种实验方法利用 PhosphoScan® 技术,将 RxRxxS/T Motif Antibody 用作亲和力试剂来对 Akt、RSK 和 p70 S6 激酶的磷酸化底物进行选择性免疫沉淀。使用含有对 PI3K、mTOR 和 MEK 具有特异性的抑制剂的靶向癌症药物,可对这些 RTK 的下游信号转导网络进行比对。底物包括与支架、蛋白质稳定性、代谢、转运和迁移等许多细胞功能有关的蛋白。

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