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流式细胞术技术支持

为了确保及时地获取解决方案,请在联系我们时准备好以下信息。

请提供以下信息

  1. 您正在使用哪种 CST 抗体(靶标、稀释度、批号和参考日期)?您正在使用哪种二抗(供应商、荧光物质、稀释度)?
  2. 您之前是否成功使用过这种二抗?
  3. 您正在使用哪种类型的细胞(全血、PBMC、细胞系、骨髓细胞、分离组织...)?
  4. 简要描述固定/通透实验步骤(尤其是,您是否使用甲醇来通透,或使用试剂盒?)。
  5. 您是否同时需要使用其他标记物/设门抗体(CD45、细胞角蛋白等)?
  6. 如何刺激/抑制这些细胞?(请在您的答案中解决以下问题)
    1. 您是否确定这些细胞中存在靶标?
    2. 如果您正在使用某种磷酸化抗体,那么该实验步骤是否经证实会影响该靶标的磷酸化?
    3. 您是否有阳性/阴性对照(血清饥饿、特异性抑制剂、激活的配体等)?
  7. 细胞处理后与固定前之间相差多长时间?

没有信号的主要原因

  • 使用了错误激光/含荧光物质的 PMT。
  • 固定和通透不充分(针对胞内抗原的多数抗体不适合用于商业固定和通透试剂盒,这些试剂盒使用去垢剂进行通透)。
  • 刺激并未诱导所需靶标的磷酸化。
  • 靶标被去磷酸化(刺激和固定之间等待了太长时间,如固定前用 CD 孵育)。
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