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改变蛋白质印迹法实验推荐步骤

Cell Signaling Technology (CST) 抗体已使用我们建议的且由 CST 科学家开发和优化的蛋白质印迹实验步骤进行了验证。产品网页和数据表上所示的所有数据均为使用这些实验步骤所产生的数据。我们强烈建议遵循我们的实验步骤,以便在使用我们的所有抗体时可以获得最优结果。下面的一些示例显示了对标准实验步骤的微小变更可能会影响您的结果。

裂解物制备

超声处理与未进行超声处理比较
Phospho-Histone H3 (Ser10) Antibody #9701

Phospho-Histone H3 (Ser10) Antibody #9701

CKR/PAEC 细胞提取物

一抗稀释缓冲液

牛奶与 BSA 比较
Phospho-Akt (Ser473) Antibody #9271

牛奶与 BSA 比较

C2C12 细胞 + 胰岛素

一抗孵育

在 4°C 下过夜与在室温下 2 小时

PKCδ Antibody #2058

PKCdelta Antibody #2058

HeLa 细胞提取物

洗涤和稀释缓冲液

TBS-T 与 PBS-T

Phospho-c-Jun (Ser63) II Antibody #9261
c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165
Ribosomal Protein S3 Antibody #2579
Calnexin (C5C9) Rabbit mAb #2679
Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb #2855

TBS-T

TBS-T(按 CST 实验步骤中的建议)

PBS-T

PBS-T(已更改的实验步骤)

转移和抗体孵育

Cell Signaling Technology 建议湿转移(按制造商的建议),随后封闭 1 小时并在 4˚C 下过夜孵育一抗。

iBlot® 是一个可在 7 分钟内完成转移的干式印迹系统。SNAPi.d.™ 是一个真空操纵式孵育系统,可将抗体孵育时间缩短至不到 30 分钟。

Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb #9215

湿转移  CST 建议孵育。

湿转 CST 建议孵育

iBlot(快速转移-Invitrogen)  SNAPi.d.(快速孵育-Millipore)

iBlot®(快速转移-Invitrogen)SNAPi.d.™(快速孵育-Millipore)*,确定用于 SNAPi.d.™ 的最佳抗体浓度

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