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蛋白质印迹法与免疫沉淀法

蛋白印迹法是一项广泛用于检测细胞或组织提取物中蛋白表达水平的技术。这项技术借助抗体与目的蛋白的结合作用,测量生物样品中的蛋白质水平。

蛋白质印迹法

公司的严格验证实验步骤有助于我们提供特异和可靠的抗体,这些抗体可帮助您每次都取得有意义的可重复性数据。

验证:推荐使用特定缓冲液和实验步骤,使我们的抗体达到最佳稀释度。此数据经过对多种实验参数进行大量测试后得出。

对照:我们推荐阳性和阴性对照细胞提取物,这样您可以检验您的抗体性能,并优化实验条件。

实验步骤:我们会为您提供详细的实验步骤,这样您可以迅速启动实验并最大限度减少时间和试剂浪费。

我们提供一套完整的配套产品,这些产品都通过了公司实验步骤内部验证,因此您可以获得所需的全部试剂以完成实验。

蛋白质印迹法配套产品

免疫沉淀法配套产品:

蛋白质印迹凝胶

使用 ​Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060(左) 和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(右),对来自各种细胞系的提取物的进行蛋白质印迹,这些细胞系未处理或如所示用 LY294002 #9901(PI3K 抑制剂)、Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917(其借助 IGFIR 结合作用激活 Akt)或Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913(其通过受体结合作用诱导 PI3K/Akt 通路)处理。

免疫沉淀法 (IP) 是指从不均一的细胞或组织提取物中使用靶标特异性抗体富集特定蛋白质的一项技术。免疫共沉淀法 (co-IP) 是完整蛋白质复合体的沉淀过程。IP 和 co-IP 是广泛运用于鉴定蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质复合体中新成员的一项重要技术。

CST 为 IP 实验和 co-IP 实验提供高品质抗体,这些抗体已使用详细实验步骤进行验证过。高度的抗体特异性和经彻底验证的可用配套产品(包括 IP 微珠和缓冲液)用于确保获得可靠的 IP 数据和 co-IP 数据,以阐明蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质复合体组成。为了节省时间和试剂,多种与琼脂糖凝胶或磁珠偶联的抗体可供您选择,用于直接 IP 实验和 co-IP 实验。

可定制与琼脂糖凝胶和磁珠偶联的抗体 – 如需了解更多信息,请联系我们

免疫沉淀数据

图 A. 在不使用一抗(泳道 2),使用 Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725 批次 1(泳道 3)或 Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725 批次 2(泳道 4),从 PC-3 细胞提取物免疫沉淀神经纤毛蛋白-1。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725 批次 2,进行蛋白质印迹分析。

图 B. 在不使用一抗(泳道 2),使用 α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 批次 1(泳道 3)或 α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 批次 2(泳道 4),从小鼠脑组织提取物免疫沉淀 α-Synuclein。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 批次 2 进行蛋白质印迹分析。在蛋白质印迹法中​ Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678​ 可用来避免识别兔 IgG 重链和轻链。

图 C. 使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2),Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 批次 3(泳道 3)或 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 批次 6(泳道 4),从 Etoposide #2200(25 µM,5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物免疫沉淀 Caspase-3。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 批次 6 进行蛋白质印迹分析。在蛋白质印迹法中​ Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678​ 可用来避免识别兔 IgG 重链和轻链。

免疫共沉淀数据

上文显示的免疫共沉淀数据是使用靶向各种复合体组分的抗体沉淀 mTORC1 复合体,这些复合体组分包括:GβL、mTOR 和 Raptor。全部数据均使用 Hela 细胞提取物和下文中的抗体生成。泳道 1 是 10% input,泳道 2 是 pull-down。

图 A. IP: GβL (86B8) Rabbit mAb #3274蛋白质印迹探针: mTOR Antibody #2972

图 B. IP: mTOR Antibody #2972蛋白质印迹探针: Raptor (24C12) Rabbit mAb #2280

图 C. IP: Raptor (24C12) Rabbit mAb #2280蛋白质印迹探针: GβL (86B8) Rabbit mAb #3274

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