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何时使用免疫组织化学 (IHC)

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在保持原组织成份、细胞特征以及结构的情况下,免疫组织化学 (IHC) 利用抗体检测和分析该组织细胞中的蛋白质表达。IHC 在诊断疾病中的异常方面尤为有用,例如可获取肿瘤样本的癌症,但需获得背景数据。

IHC 切片制备

免疫组织化学 (IHC) 切片制备。

免疫组织化学与免疫细胞化学对比

ICC 和 IHC 有哪些优势?

正如名称所暗示的,免疫细胞化学 (ICC) 与免疫组织化学 (IHC) 之间的差别在于您检测的是细胞中的目的抗原 (ICC)还是组织切片 (IHC)。ICC 非常适合用来确定细胞是否表达某种蛋白,同时还提供亚细胞定位,并在多重样式中用来确定多种蛋白是否在同一位置。

哪些样本用于 ICC 和 IHC?

IHC 可使用冷冻或石蜡包埋的组织切片,而 ICC 被用于证明细胞中蛋白质的存在和定位。ICC 可以使用贴壁培养细胞系或(相对较少)细胞系悬液或从人体或动物来源分离的细胞。

ICC 和 IHC 中使用哪些检测?

与 IHC 相似,可通过显色或荧光检测 ICC。传统上使用显色法检测,这是一种采用辣根过氧化物酶 (HRP) 把底物(例如 DAB)转换成能使抗原可视化的彩色产物的方法。然而,由于多重标签的易用性,荧光检测方法已在 ICC 应用中赢得了广泛欢迎,并正在 IHC 中受到欢迎。

在 CST 网站和科学文献的其他地方,这种区别可能会令人困惑。在 CST,您将发现使用荧光检测对 ICC 进行验证的抗体被列为 IF/IC

免疫组织化学与蛋白质印迹法对比

WB 和 IHC 的优势是什么?

蛋白印迹法 (WB) 也称免疫印迹法,它是一种被广泛应用并得到认可的技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。WB 借助抗体与目的蛋白的结合测量生物样品中的蛋白质水平。抗体与其靶点蛋白表位的精确结合可用于检测蛋白质中具有高度特异性的氨基酸序列。

WB 在定量方面极其敏感,可检测极少量的蛋白。相比之下,IHC 的优势在于完整组织的背景。WB 通常用作辅助检测确认抗体特异性和提供定量性更强的蛋白质水平分析。然而,在 WB 和 IHC 检测中,一抗识别的表位可能不同。

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IHC WB Phospho p44/42 MAPK 4370

Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370: 使用 #4370(上)或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695 (下)对用 λ 磷酸酶处理(以抑制剂磷酸化)或 TPA #4174 处理(以刺激磷酸化)的来自293、 NIH/3T3 和 C6 细胞的提取物进行的 WB 分析。

哪些样本被用于 WB 和 IHC?

如上所述,IHC 被用于检测和分析组织样品中的蛋白质表达,优点是保持原组织样品中的组成、细胞特征和结构。相比之下,WB 被用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。

WB 和 IHC 中使用哪些检测?

WB 结果检测可以采用化学发光或荧光。化学发光检测具有易用性,而荧光检测提供数字数据存储且易于定量。采用荧光标记二抗的 WB 测需要专业的仪器,如荧光成像器。荧光检测正变得越来越普遍,因为成像时间更短,结果可量化,还可以进行数字化数据存储。荧光检测使得磷酸化和总蛋白水平可在同一个膜上确定,不同分子量大小的靶标调节可同时进行检测。

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IHC 与 ELISA 对比

ELISA 和 IHC 的优势是什么?

CST 已经将其抗体专长用于识别在固相夹心酶联免疫吸附检测 (ELISA) 中具有最佳活性的抗体对。这些检测可检测细胞裂解物中的少量靶标蛋白。

总体而言,ELISA 检测在定量方面比 IHC 检测更敏感。然而,IHC 测定法可在给出半定量组织概览的背景下提供结果。ELISA 也可以设置为以相对较高的通量执行,经常在纳入最佳实验步骤的情况下以一个试剂盒形式使用。要浏览 ELISA 试剂盒,请点击这里

哪些样本可用于 ELISA 和 IHC?

可以使用相对广泛的样品类型进行 ELISA 测定,包括血清、血浆、细胞培养基等。然而,单个 ELISA 试剂盒仅能针对特定样品类型进行验证,这些信息将在数据表中列出。如上所述,IHC 测定法利用组织切片显示背景中的蛋白表达。

在 ELISA 和 IHC 中使用哪些检测?

可以使用直接或间接方法检测 ELISA 测定结果。

在直接 ELISA 测定中,抗体用碱性磷酸酶 (AP) 或 HRP进行标记。HRP 和 AP 底物通常产生比色产物,可通过分光光度计读取。也可通过荧光标记抗体进行检测。

在间接 ELISA 中,将抗体与生物素连接,然后是链霉偶联酶的步骤。也可以使用未标记的一抗,之后是酶偶联或生物素化二抗的步骤。如果二抗被生物素化,则检测需要另一个步骤。在这里,先是链霉亲和素酶偶联物处理,之后加入适当的底物。

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