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什么是免疫组织化学 (IHC) 染色?

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免疫染色使用抗体检测细胞或组织中的抗原。免疫组织化学 (IHC) 中免疫染色的主要好处在于在保持空间环境和组织架构,同时在组织样本中查看所需靶标。

免疫组织化学 (IHC) 染色?短定义

染色类型

免疫染色可以直接或间接执行。将我们经应用验证的抗体与一些荧光基团接合以实现直接标记。如想浏览我们提供的直接接合物,请点击这里

通常,基于抗原表达水平和可接近性,直接接合物不足以可视化关注靶标。在这些情况下,使用二抗间接标记。CST 的首选方法是使用专门针对兔或小鼠 IgG 的高敏感性一步式基于聚合物的检测试剂。

IHC mIHC 多重选择

IHC 染色示例

在 CST 进行的 IHC 染色的一些示例如下所示。为了有把握评估所需抗原的特定检测,下面使用的每种抗体都经历了我们严格的验证过程。

IHC 13684 PDL1

PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb #13684: 使用 PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行的 IHC 分析。

IHC 64326 CD133

CD133 (D2V8Q) XP® Rabbit mAb #64326: 使用 CD133 (D2V8Q) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行的 IHC 分析。

Immunohistochemistry-IHC-19245-a-Smooth Muscle Actin.png

α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb #19245: 使用 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb 在 Leica® Bond™ Rx 上对石蜡包埋的人子宫内膜样癌进行的 IHC 分析。

如何进行免疫组织化学 (IHC) 染色?

组织制备

影响组织的收集、保存和固定方法根据样品或关注靶标而变化组织的收集和固定直接影响样品完整性和您的实验结果。

福尔马林等交联固定剂常用于制备 IHC(免疫组织化学)样品,因为它们会保留组织的结构完整性,有助于维持组织架构。另一种选择是冻存(冻结)您的样本,如果您试图检测磷酸化靶标,这可能是更好的选择。

抗原(表位)修复

用于保持组织样品结构完整性的固定剂也存在缺陷,它们可能会隐藏您的抗体旨在识别的表位。

有几种方法可用来显示在固定过程中被隐藏的表位。这些方法包括依赖于蛋白酶 K 等酶的蛋白水解诱导抗原修复法,或者利用热来解开交联键和分解蛋白的热诱导表位修复法 (HIER)。其中任意一种方法都能显示表位,使它更容易结合一抗,更顺利地进行 IHC(免疫组织化学)染色。

在 CST,我们最常见的抗原修复方法是 HIER。我们的科学家对多种抗原修复方法进行了检测,以确定各抗体在 IHC 中的最佳使用条件。来自 CST 的推荐实验步骤可在任何 IHC 验证抗体的数据表中获得。

抗体结合

选择正确的抗体是获得 IHC 成功结果的最关键步骤之一。来自 CST 的所有 IHC 验证抗体不仅已确认在组织中具有强信号,而且经过严格的验证程序来确认信号的特异性。我们在 CST 专门从事 IHC 的科学家们检测了大量的抗体,并只推荐了最适合该应用的抗体。

点击这里浏览针对您靶标的 IHC 验证抗体。

检测系统

免疫组织化学 (IHC) 染色允许 2很多类别检测:1) 显色和 2) 荧光。对于显色法检测,CST 建议使用基于聚合物的系统以避免基于生物素系统的局限性,同时增加检测的敏感性。

根据您一抗的宿主尝试 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, rabbit) #8114SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, mouse) #8125

基于聚合物的 IHC 检测

基于聚合物的检测比基于生物素系统更敏感。 利用 Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb #3579 和采用基于生物素的检测(左图)或基于聚合物的检测(SignalStain® Boost IHC Detection Reagent #8114;右图)对石蜡包埋的人肺癌进行的 IHC 分析。如图所示,基于聚合物的检测敏感度更高,染色强度更好。

IHC DAB 底物性能

并非所有 DAB 底物均可达到同等的效果 。利用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145 对石蜡包埋的人乳腺癌进行的 IHC 分析 。利用 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059(左)、竞争者 1 提供的 DAB(中)或竞争者2提供的 DAB(右)进行显色法检测。尽管竞争者 2 DAB 产生的信号与SignalStain® DAB Substrate Kit 的信号相当,但竞争者 1 的 DAB 产生的信号明显较弱。

复染

抗体检测结束后,多数研究者倾向于对组织复染,以凸显细胞结构,在特殊染色方面引导观察者。在 CST ,我们采用苏木精#14166 对样品进行复染,胞核染色呈蓝色。所选的复染剂必须与所使用的色原匹配。例如,若复染剂染色颜色与色原颜色过于接近,则难以辨别抗体信号。

免疫组织化学 (IHC) 染色实验步骤

下文概述了我们所推荐的操作步骤,被强调的是成功实验的关键步骤。CST 旨在通过提供经验证的抗体和试剂来帮助您改进 IHC 分析,从而使您只需要稍加优化就能够遵循一个简单的产品专属实验步骤,并且获得可重复的结果。

观看 IHC 实验步骤视频或访问我们的实验步骤选择页面

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