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使用免疫组织化学法验证抗体

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免疫组织化学法 (IHC) 涉及使用特殊一抗对组织样品中的细胞蛋白进行标记,并使用检测试剂使靶标变得可视化。Cell Signaling Technology (CST) 提供超过 800 种经 IHC 验证的抗体、IHC 稀释剂、检测试剂、底物和对照物,可确保您的 IHC 研究产生准确可重复的结果。在免疫组织化学分析中,确定靶标特异性需要多个验证步骤。CST 的科学家们视情况使用各种方法来验证每种 IHC 推荐的抗体,以确保您所观察的使用每种抗体进行的染色均具有特异性,并且是可信的。

验证步骤包括

  • 进行蛋白质印迹分析,以证实相应分子量的特异性条带以及最小交叉反应性条带。
  • 使用已知靶标表达水平的石蜡包埋的细胞沉淀物来验证靶标特异性。
  • 在相关小鼠癌症模型中评估抗体性能。
  • 使用已知靶标表达水平的细胞系所产生的异种移植物来帮助验证靶标特异性。
  • 使用人癌组织芯片来证实抗体在广泛组织类型中的性能。
  • 在适当时候,对新鲜冷冻的组织进行染色。
  • 对组织切片和细胞沉淀物进行磷酸酶处理,以验证靶标磷酸化特异性。
  • 使用封闭肽验证特异性,并排除 Fc 介导的结合和其他非特异性染色。
  • 彻底的批次检测可确保获得准确 IHC 结果所需的可重复性。
  • 预先决定和指定稀释度和实验步骤;也提供对照试剂。
细胞沉淀物

细胞沉淀物: 使用 HER3/ErbB3 (D22C5) XP®Rabbit mAb #12708(顶部小图)对转染人 erbB 家族成员 HER3、EGFR、HER2 和 HER4(从左到右,如图)的石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。使用 EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb #4267(左下图)、HER2/ErbB2 (D8F12) XP® Rabbit mAb #4290(中下图)和 HER4/ErbB4 (111B2) Rabbit mAb #4795(右下图)来确认转染情况。

封闭肽

封闭肽: 在添加对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)的情况下,使用 Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb #5741 对石蜡包埋的人扁桃体细胞进行免疫组织化学分析。

异种移植物

异种移植物: 使用 ROS1 (D4D6) Rabbit mAb #3287 对石蜡包埋的 HCC78 异种移植物进行免疫组织化学分析。

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