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使用流式细胞术验证抗体

我们经流式细胞术验证的产品已在生物相关模型上进行了严格检测,可确保偶联和非偶联抗体的特异性和最佳信噪比 (S/N)。交叉平台验证可进一步确认抗体特异性。此外,对所有抗体检测了最佳稀释度、特异性、稳定性和批间可重复性,以确保它们自首次使用之后随时有效。

有了我们经流式细胞术彻底验证的抗体,便可检测细胞系、分离组织、抽吸物或血液样品中复杂的胞内信号转导级联,并信任您的结果的准确性。

验证包括:

  • 使用阳性和阴性细胞系。
  • 与同型对照比较信号,以估计一抗的非特异性结合
  • 使用通路特异性抑制剂/激活剂处理
  • 使用封闭肽、siRNA 和/或表达载体处理
  • 进行磷酸酶处理来确认磷酸化特异性
  • 进行广泛的质控检测,以保证过一段时间后的稳定性,并估计批间变化情况
  • 优化实验步骤并确定最佳稀释度
  • 在多种应用中验证,以确认抗体特异性

我们抗体的性能在多种平台上进行接受常规验证。下面的例子证实了为什么这样的检测是必要的。

在流式细胞术和免疫荧光法中进行的对比分析确认,CST 抗体可特异性检测靶标。虽然信号不是很稳定,但可正确定位至细胞的胞核区室。

A.

Phosphostat 5

B.

Phosphostat 5 竞争者

流式细胞分析表明,与使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb #4322 所获得的低倍性诱导相比,竞争者的 Phospho-Stat5 (Tyr694) antibody 所产生的信号更亮 (A)。但免疫荧光分析表明,竞争者的抗体会有不适当的细胞浆和质膜染色,而 #4322 则显示仅有相应的胞核染色 (B)。

阳性和阴性细胞系 - #13355

使用 CD102/ICAM-2 (D7P2Q) Rabbit mAb #13355 对 HeLa(蓝色)和 HUVEC(绿色)细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 用作二抗。

同型对照例子 - #92711

使用 Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb #92711 (A、B) 或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (C、D) 对未经 (A、C) 或已经交联的抗 CD3 + 抗 CD28(各 10μg/ml,15 分钟;B、D)处理且用 CD3 antibody 共染色的人 PBMC 进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

同型对照例子 - #3900

以浓度匹配的 #3900 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(红色)作为对照,使用 CREB (D76D11) Rabbit mAb Antibody #4820(蓝色)对 SH-SY5Y 细胞进行流式细胞分析。

激活剂/抑制剂处理 - #9669。

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Antibody (Alexa Fluor® 488Conjugate) #9669 对未经(蓝色)或已经 Etoposide #2200(绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

同型对照例子 - #3900

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (C、D) 作为对照,使用 PD-1 (D4W2J) XP® Rabbit mAb #86163 (A、B) 对未经 (A、C) 或已经抗 CD3/CD28(72 小时;B、D)处理且用 CD3 antibody 共染色的人 PBMC 进行流式细胞分析。

CST 为每种抗体确定了最佳浓度和染色实验步骤。

BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292 的滴定。

使用梯度稀释的 BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292 对未掺入(红色)或掺入 BrdU 30 分钟(蓝色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。倍性诱导比率如绿色所示。#5292 的最佳浓度确定为 0.044 µg/ml。

OX40 (D1S6L) Rabbit mAb #15123 的甲醇通透液

使用甲醇通透液 OX40 (D1S6L) Rabbit mAb #15123 时,与 HUT-102(阳性对照)相比,Jurkat 细胞(阴性对照)显示出非特异性结合 (A)。但使用 Triton X-100 进行通透处理时,非特异性结合显著减少,从而导致相同浓度的抗体产生更高的信噪比 (B)。

Btk (D3H5) Rabbit mAb 可用于选择性分离人全血中的 B 细胞。 使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb #8547 染色

人全血按照 CST 流式细胞术备选实验步骤进行固定、裂解和通透处理,并使用 Btk (D3H5) Rabbit mAb #8547 进行染色。细胞设门如 (A) 所示。样品使用 CD3-PE 和 CD19-APC 共染色,以区分 T 和 B 细胞亚群 (B)。B(红色)和 T(蓝色)细胞群设门用于表示 Btk 平均荧光强度的柱状图 (C)。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

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