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酶联免疫吸附剂测定法 (ELISA) 检测类型

ELISA 有多种常用方法类型。根据生物学问题、可用的结合物以及检测方法,会使用这些方法的多种其他衍生方法。

直接 ELISA 检测

直接 ELISA 与其他 ELISA 方法不同,因为抗原与微孔板的孔直接结合,而且直接偶联检测(或结合)抗体,相比之下,间接 ELISA 中使用一种偶联二抗。

简单地说,抗原包被和固定到微孔板表面后,添加一种封闭剂来防止检测抗体出现非特异性结合。接下来,将一种直接偶联某种酶(例如 HRP)的检测抗体添加到孔中,随后添加该酶的一种底物。短暂孵育并添加停止液后,用读板机测定信号。

直接 ELISA 检测具有最简单的整体设置。

ELISA 直接检测

ELISA 直接检测

间接 ELISA 检测

虽然与直接 ELISA 类似,但间接 ELISA 使用一种偶联二抗检测结合抗体。

总的来说,遵循直接 ELISA 的前几个步骤,包括固定和封闭。添加一种检测抗体,但与直接 ELISA 不同,该抗体未偶联。然后添加第二抗体(与酶偶联)来检测第一结合抗体。在添加一种底物和停止液前,进行另一个洗涤步骤。然后使用一个读板机检测信号。

使用一种第二或第二/第三抗体进行检测不仅会导致信号扩增,还会导致流程变长、更耗时且更复杂。

ELISA 间接检测

ELISA 间接检测

夹心 ELISA 检测

在夹心 ELISA 中,将捕获抗体吸附在 ELISA 平板上,这与抗原相反。此外,两种抗体(一种是捕获抗体和另一种是检测抗体),因此形成一个像“夹心结构”的复合体。

简单地说,在清洗和封闭固定的捕获抗体后,将含有抗原的样品添加到微孔板上。添加一种会结合样品分子其他区域的检测抗体。这种抗体可直接偶联酶。如果未偶联,则使用一种第二抗体(与酶偶联)检测第一结合抗体。清洗孔后,添加该酶的底物,然后进行短暂的孵育并添加停止液。通常在一个读板机上测定每个孔的信号。

在 CST,我们提供多种类型的夹心检测试剂盒,包括 PathScan®(一种传统固相 ELISA 形式)和 FastScan™(一种基于溶液的 ELISA 检测形式)。虽然每种技术都为夹心检测形式,但后者能更快地生成结果,且步骤和洗涤次数更少。这是因为会产生一个夹心复合体(由抗体和分析物组成),并且随后用亲和力标签将溶液中的分析物固定在平板上。了解更多有关哪种类型更适合您的信息。

ELISA PathScan ELISA 比较

比较 Pathscan 和 FastScan ELISA 抗体-CaptSure

竞争性 ELISA

竞争性 ELISA(也称抑制或封闭 ELISA)通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰,来测定该分析物在样品中的含量。

可通过两种方式进行竞争性 ELISA:微孔板可用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被。可添加一种有部分某种检测(例如一种偶联的荧光染料)的靶标分析物,以竞争结合抗体上的位点。结合量较低表明样品中的靶标分析物含量高。

信号与分析物含量呈负相关,因此,如果靶标分析物的浓度高,则分析物竞争性结合有限量的标记抗体,从而使参考信号减弱。

ELISA 类型

  优点 缺点
直接 整体检测设置简单 用于检测的每种抗体必须偶联
测量样品中抗体量的理想形式 可能产生更强的背景信号,因为包被抗原会非特异性地结合表面,而且可能会以一种非原生构型呈递给抗体
  不能用于多重检测
间接 灵敏度比直接 ELISA 高 由于步骤数量较多,实验步骤通常耗时长,且更容易出错
可使用偶联的第二抗体进行多次检测(前提是使用相同的结合抗体物种进行所有不同的检测);划算 可能增强非特异性结合和背景信号,因为所需试剂数量更多
第二抗体将会使信号扩增  
夹心 一般来说,更具有特异性,因为该检测需要两种抗体检测目标分析物 匹配抗体对的开发可能成本高昂,并且耗时
竞争性 用于对含有低分析物浓度的样品进行定量测定  
用于检测免疫应答  

多重 ELISA

多重 ELISA 可让研究人员一次性评估多个蛋白靶标的水平,它通常用于同时测定多个细胞因子的表达。与传统 ELISA 形式不同,多重 ELISA 方法采用以下一种或多种技术:流式细胞术、荧光、化学发光或电化学发光法。

流式细胞分析是最常用的多重 ELISA 方法,并使用珠子偶联抗体进行。通常,与其他方法相比,使用流式细胞术和珠子偶联抗体可以一次性测定更多细胞因子。

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