对促销感兴趣? | 点击此处 >>

酶联免疫吸附剂测定法 (ELISA) 检测原则

检测抗体或抗体对

在 ELISA 中准确测量抗体与抗原的结合将取决于抗体对抗原的特异性。抗体特异性较差会导致高度非特异性的背景。相比之下,特异但微弱的结合可能被洗掉,导致不真实的低信号。因此,必须选择合适的抗体,才能在检测中避免这些问题以及抗体之间的交叉反应性。

夹心 ELISA 需要两种抗体:一种用于捕获,另一种用于检测。它们通常被称为一个“匹配对”。在多数情况下,夹心检测更具特异性,因为这种检测需要 2 种抗体来检测目的靶标。

CST 提供已检测到优化抗体对的 ELISA 试剂盒,从而为每次实验提供可靠且可重复的数据。

包被 ELISA 平板

使用适当的缓冲液将一种特定抗体或抗原包被在 ELISA 平板上。被动吸附需要对条件进行优化,因为它们受多种因素影响,包括塑料的表面化学、温度、包被缓冲液的 pH、抗原/抗体浓度和时间。

典型的包被缓冲液包括磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、碳酸氢钠或类似缓冲液,但应测试和优化这些条件。重要的是,包被缓冲液不应含有会竞争地结合抗原或抗体的蛋白。

使用抗体捕获抗原

抗原捕获的方法将取决于所选的 ELISA 类型:

  • 直接 ELISA - 酶偶联抗体结合某个表面的抗原。
  • 间接 ELISA - 类似于直接 ELISA,但不偶联结合的一抗。使用一种偶联二抗来检测一抗。
  • 夹心 ELISA - 对不同表位具有特异性的2个抗体能检测抗原,形成一个类似于夹心结构的复合体。

检测分析物

在用抗体检测分析物之后,将底物添加到孔中。抗体酶偶联物会与底物发生反应,产生一种比色、化学发光或荧光信号。通常用一个微孔读板机上测定产生的信号。

可更改孵育时间和温度,以产生最佳信噪比。

Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink