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酶联免疫吸附剂检测 (ELISA) 组分

抗体

ELISA 高度取决于抗体选择,因此应评估用于捕获及直接/间接检测的任何抗体的:

  • 特异性:该抗体应结合单一物种中某个抗原上的一个表位
  • 亲和力:应快速、强烈结合
  • 亲合力:一旦结合,抗体-抗原复合体应是稳定的

匹配对

在一次夹心 ELISA 中,需要两种抗体,通常称为一个“匹配对”。每种抗体结合靶标/抗原的一个不同表位,并复合成为一个“夹心”结构。需要两种抗体会增加开发测定法的难度,但也会产生一种更具特异性的测定法。

CST ELISA 试剂盒中使用的匹配抗体对已经过优化,对每个靶标使用预定数量的捕获和检测对。CST 验证每种抗体和试剂盒是否可靠,并提供可重复的结果。

捕获和检测抗体

在 ELISA 中可使用单克隆和多克隆抗体,但各自都能提供某些有利于实验者的优势。

单克隆抗体对单一表位有特异性,因此它们不会干扰其他抗体与该抗原其他区域的结合。它们也不太可能非特异性地结合其他抗原。因此,单克隆抗体可在一个 ELISA 中的所有步骤中使用,并且作为非竞争性抗体的匹配对的一部分,对夹心 ELISA 尤其有用。大多数 CST ELISA 试剂盒都采用单克隆抗体设计,并且可针对各种研究主题提供可靠且可重复的结果。

多克隆抗体是指可结合同一抗原上不同区域的一组抗体。虽然单克隆抗体的特异性程度更高,但多克隆抗体能结合多个表位,因此可能产生更强的信号。

ELISA 缓冲液

一次 ELISA 实验需要各种缓冲液,包括裂解、包被、封闭、洗涤、稀释和检测缓冲液。虽然这些缓冲液的基本配方可单独提供,但大多数可以在市场上买到,以便简化实验并加速、简化及标准化每种 ELISA 的流程。开发这些缓冲液是为了增强特异性、可重复性和灵敏度,并最大程度降低成本。

CST 为研究人员提供一系列在内部生产且经彻底验证的 ELISA 产品,以确保最高可能的产品质量和支持。CST 缓冲液经优化可与其他 ELISA 试剂盒组分或任何 CST ELISA 抗体对一同使用,而且它们可单独出售,也可以试剂盒形式出售。

包被缓冲液

需要包被缓冲液来使抗原或抗体稳定,以促进它被动吸附到微孔板表面,而不改变表位。

氨基酸与微孔板孔之间的疏水相互作用会导致抗原或抗体吸附和固化,而且会受多种因素的影响,包括温度、pH、浓度和时间。

封闭液

在包被缓冲液之后添加封闭缓冲液,以防止检测抗体与微孔板表面出现非特异性结合。这些缓冲液应包含最佳浓度的非离子去垢剂和/或非特异性蛋白,且不应包含将干扰检测的组分。

洗涤缓冲液

洗涤缓冲液在各步骤之间用来去除所有未结合的物质,并且需要在使用后完全去除。这些缓冲液应有适当的 pH 且包含适量的盐和去垢剂,以降低背景噪音并使抗体-抗原复合体稳定。洗涤次数、每次洗涤的时长以及缓冲液中的去垢剂含量均需要优化。

检测缓冲液

检测缓冲液由抗体-酶复合体进行催化所需的底物组成。许多底物都受缓冲条件影响;因此,必须考虑检测中其他缓冲液的组成,以减少检测分子的非特异性剪切。

ELISA 平板

ELISA 微孔板有多种样式,包括固体或带孔。最常见的平板有平坦孔底,可能有 96 或 384 个孔。使用专为 ELISA 实验设计的平板非常重要,因为它们是专门制造的,拥有最佳条件并增加实验之间的一致性。

某种特定平板类型的选择将由要运行的 ELISA 类型确定:比色法、荧光法或化学发光法。比色测定法使用透明孔板,而化学发光 ELISA 在不透明的白色平板上进行,荧光法则使用黑色平板,以最大程度减少背景信号发射。

ELISA FastScan 微孔

ELISA 读板仪

一次 ELISA 使用的检测方法类型将决定测量信号输出所需的微孔读板仪类型。考虑动态范围和检测灵敏度将影响是否使用比色、化学发光或荧光反应。

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