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酶联免疫吸附剂检测 (ELISA) 概述

什么是 ELISA?

酶联免疫吸附剂检测 (ELISA) 是一种特殊的酶免疫测定 (EIA) 类型,可使用抗体定量某种目标分子。抗体用于特异性检测分析物(例如肽、蛋白、抗体、小分子)。酶(例如辣根过氧化物酶 (HRP))直接或间接偶联该抗体,从而提供检测方法并可能扩增信号。

ELISA 与其他免疫测定不同,这种技术在使用溶液样品时会扩增信号。

ELISA Cyclic AMP Assay Kit #4339

Cyclic AMP XP® Assay Kit #4339: 使用 Cyclic AMP XP® Assay Kit #4339 检测发现,CHO 细胞用 Forskolin #3828 处理会增加 cAMP 浓度。CHO 细胞按 4x104 个细胞/孔放在 96 孔板上进行培养,并孵育过夜。细胞不作处理或用 0.5 mM IBMX 预处理 30 分钟,随后进行 forskolin 处理(15 分钟)并用 1X Cell Lysis Buffer #9803 进行裂解。吸光度值(左图)和活性百分比(右图)如上所示。活性百分比按照以下公式计算:% 活性 = 100x [(A-A本底)/(A最大-A本底)],其中 A 为样品吸光度,A最大为最大刺激(即高 forskolin 浓度)时的吸光度,A 本底为在本底水平(无 forskolin)时的吸光度。Forskolin 会直接激活腺苷酸环化酶,并使细胞 cAMP 浓度升高。IBMX 是 cAMP 和 cGMP 磷酸二酯酶的一种非特异性抑制剂,能促进 cAMP 和 cGMP 在细胞中聚集。

ELISA 有什么用?

ELISA 提供一种简单、可靠和经济合算的方法来分析并定量各种样品类型(例如细胞裂解物、组织裂解物或血清)中的一种或多种抗原。

ELISA 是一种受欢迎的、用于研究和诊断样品的技术,可用作一种单独的样品检测或高通量筛选方法。

ELISA PathScan® Phospho-Akt Sandwich ELISA #7252

PathScan® Phospho-Akt (Thr308) Sandwich ELISA Kit #7252 未经处理和已经 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞的裂解物蛋白浓度与使用试剂盒测得的光密度读数之间的关系如图所示。饥饿后,NIH/3T3 细胞(85% 融合度)在 37ºC 下用 PDGF (50 ng/ml) 处理 10 分钟后再进行裂解。

ELISA 如何工作?

根据进行的 ELISA 类型,有几种实验设置。

通常在一个吸附抗原或捕获抗体的微孔板中进行所有这些设置。它们依赖于抗体酶偶联物的信号扩增,而偶联物将与目标抗原结合。

添加的酶底物将产生颜色、荧光或发光变化,并且可进行检测和定量。

根据所选抗体能否高度特异性地结合目的抗原,可预测实验是否成功和结果是否可靠。除了特异性,选择的抗体还应对抗原具有较高的亲和力和亲合力。

何时推荐使用 ELISA 检测方法?

由于抗体试剂的特异性和检测的简洁性,ELISA 被视为生物样品定量分析的一个黄金标准。

ELISA 可广泛用于多个研究领域以及诊断筛选。Cell Signaling Technology 为研究领域提供 ELISA 解决方案,例如:

  • 磷酸化特异性和总蛋白评估
  • 分泌蛋白表达
  • 翻译后修饰评估
  • 免疫学研究
  • 神经学研究
  • 癌症

需要空间分辨率来分析结果时,不能使用 ELISA。

与蛋白印迹法相比,ELISA 提供更准确的定量并考虑非变性形式的分子。

ELISA FastScan™ Total #67404 FastScan™ Phospho #42173

FastScan™ Total 对比 FastScan™ Phospho: A-431 细胞用 EGF 处理会刺激 p44/42 MAPK (Erk1/2) Thr202 和 Tyr204 磷酸化,但不影响总 p44/42 MAPK (Erk1/2) 的水平。未经和已经 EGF 处理的 A-431 细胞的裂解物蛋白浓度与使用 FastScan™ Total p44/42 MAPK (Erk1/2) ELISA Kit #67404 时在 450 nm 处的吸光度之间的关系如左侧结果图所示。
A-431 细胞用 EGF 处理会刺激 p44/42 MAPK (Erk1/2) Thr202 和 Tyr204 磷酸化,但不影响总 p44/42 MAPK (Erk1/2) 的水平。未经和已经 EGF 处理的 A-431 细胞的裂解物蛋白浓度与使用 FastScan™ Phospho-p44/42 MAPK (Erk 1/2) (Thr202/Tyr204) ELISA Kit #42173 时在 450 nm 处的吸光度之间的关系如右侧结果图所示。

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