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酶联免疫吸附剂测定法 (ELISA) 检测策略

偶联检测抗体的酶类型(最常见的是 HRP 或 AP)决定了一个 ELISA 实验的读取类型。三种最常见的检测类型包括显色法、荧光法和化学发光法,其选择取决于所需的灵敏度和信噪比。

显色检测

最常见的 ELISA 检测类型使用比色检测。一般来说,辣根过氧化物酶 (HRP-) 或碱性磷酸酶 (AP-) 偶联抗体与一种显色底物(例如 TMB)溶液结合使用。这种检测方法使用吸光度确定读数,并互相比较样品,或根据一个标准曲线确定浓度。

CST 为研究人员提供针对各种生物靶标(包括关键信号转导通路中的靶标)的一系列 ELISA 试剂盒,这些试剂盒在内部开发、生产并验证,以确保一致性结果。我们的 Pathscan®FastScan™ ELISA 试剂盒可用于广泛地选择测量总蛋白、分解产物以及翻译后修饰的各种抗体测定法。

化学发光检测

第二种方法在化学发光反应中使用过氧化物酶偶联的检测抗体(即 AP 和 HRP)。在这类实验中,同时添加一种鲁米诺增强剂溶液和一种底物,并使用光度计读取信号。如果需要一个较大的动态范围,通常使用化学发光检测。

与传统显色法检测系统相比,CST 生产的许多 PathScan® Chemiluminescent Sandwich ELISA Kits 有更宽的动态范围和更高的灵敏度。这些试剂盒包括低容量微孔板,当使用传统比色 ELISA 微孔板一半的样品量时,低容量微孔板能增强信号和灵敏度。

荧光检测

第三种方法使用过氧化物酶偶联的检测抗体(即 AP 和 HRP)和荧光底物。这种方法可以提供更强的信号和更宽的动态范围;但荧光底物的半衰期也较比色底物短。

荧光检测需要使用黑色多孔板来最大程度地减少背景。此外,还需要使用荧光计读取信号。

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