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MLL白血病的特征是混合血统白血病 (MLL) 基因的染色体易位,从而与伴侣蛋白形成融合蛋白。许多这些 MLL 融合伴侣蛋白都属于参与调节转录延伸的超级延伸复合物。MLL 融合可产生致癌转录因子,导致癌基因或肿瘤抑制基因转录调节异常,从而启动肿瘤发生。

从这些靶点开始

MLL1

MLL1 被加工为两种多肽,这两种多肽均为野生型 MLL 复合物的亚基。MLL1 的氨基末端包含在导致白血病发生的融合蛋白中。我们建议使用羧基末端特异性抗体检测野生型 MLL1,使用氨基末端特异性抗体检测 MLL 融合蛋白。

MLL 图 1

使用 MLL1 (D6G8N) Rabbit mAb (Carboxy-terminal Antigen)(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 MLL1 野生型 (WT) 和敲除型 (KO) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 的提取物进行蛋白质印迹法分析。MLL1 WT 和 KO MEF 由 Shilatifard of Northwestern University 的 Ali Shilatifard 博士惠赠。

DOT1L

DOT1L 与超级延伸复合物中的 MLL 易位伴侣蛋白相互作用,为 MLL 驱动的白血病发生所必需。DOT1L 被认为通过组蛋白 H3 Lys79 位点的甲基化驱动基因表达。

产品
DOT1L (D1W4Z) 兔单克隆抗体 #77087 – WB、IP、ChIP
MLL 图 2

使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对来自 293T 细胞的交联染色质和 DOT1L (D1W4Z) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP Human PabPC1 Exon 1 Primers #77410、Human RPLP0 Exon 2 Primers 和 SimpleChIP Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。

p300 和 CBP

p300 和 CBP 也是 MLL 融合蛋白,可通过组蛋白乙酰化驱动基因表达。

产品
p300 (D8Z4E) Rabbit mAb #86377 – WB, IP, IF, IHC
p300 (D2X6N) Rabbit mAb #54062 – WB, IP, ChIP, ChIP-seq
MLL 图 3

使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对来自 K-562 细胞的交联染色质和 p300 (D2X6N) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 从 5 ng 富集的 ChIP DNA 中制备 DNA 库,并在 Illumina NextSeq 上进行测序。结果图显示在 FDPS 基因内的结合作用。

CBP (D6C5) Rabbit mAb #7389 – WB, IP, IF, ChIP, ChIP-seq
组蛋白标记

ChIP/ChIP-seq 检测到的这些标志水平变化可能表明 MLL1、DOT1L 和 CBP/p300 向靶基因的募集发生变化。