Cell Signaling Technology

XP®单克隆抗体卓越的灵敏度

XP® 单克隆抗体卓越的灵敏度

尽管特异性是一个好抗体的最重要特征,但是当研究样品有限或蛋白内源表达水平低的时候灵敏度也很重要。我们通过免疫印迹分析将Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb #5558Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb #4858与竞争对手的产品进行了比较。我们也将#4858与Cell Signaling Technology公司的其他兔单克隆抗体#4856#4857进行了比较。

Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb #5558

  CST #5558 竞争对手1 竞争对手2
免疫印迹稀释度 1:1000 1:200 1:500, 1:250
分析浓度 (µg/mL)  0.29 0.5 1
推荐应用 W, IP, IF-IC, F W, IP W, IF-IC, F
种属交叉反应 H, M, R, Hm H, M H
Western blot analysis of CST #5558 against competitors

图1.Jurkat细胞(左)用可以抑制GSK-3β磷酸化的PI3激酶抑制剂LY294002 #9901处理,或者用Calyculin A #9902处理,它可以通过抑制细胞提取物中的磷酸酶来人为升高磷酸化水平。Calyculin A处理的样品用所有的抗体都可以在分子量46kDa的位置检测到信号,然而用#5558检测到的信号最强。注意:竞争对手2甚至出现了许多信号比46kDa位置的条带更强的非特异条带。Jurkat细胞(右)未处理或者用凋亡诱导试剂etoposide(依托泊苷)处理,这个处理可以降低GSK-3β的磷酸化水平。无论是未处理的样品还是用依托泊苷处理的样品,竞争对手的产品都不能检测到磷酸化的GSK-3β。

Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb #4858

  CST #4858 竞争对手1
免疫印迹稀释度 1:2000 1:1000
分析浓度 (µg/mL) 0.029 Unknown
推荐应用 W, IHC-P, IHC-F, IF-IC, F W
种属交叉反应 H, M, R, Mk, Sc, (C) H, (R)
Western blot analysis of CST #4858 against competitors

图2.梯度稀释未处理的NIH/3T3细胞和胰岛素处理的NIH/3T3细胞(100nM,10分钟)的提取物,用经过1:2000稀释后的#4858检测,并用生产厂家推荐的最低稀释度的竞争对手抗体(1:1000)同时检测。用#4858检测后可以观察到更强的信号,而竞争对手的抗体在最少量提取物的泳道或未处理的泳道(具有S6磷酸化的基本水平)基本看不见条带。注意:竞争对手的抗体还有交叉反应的条带,这个条带比对应目的分子量位置的条带更强,说明这个产品的灵敏度不够好。

Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb #4858 compared to Rabbit Monoclonals #4856 and #4857

Comparing western blot analysis using XP® #4858 and non-XP® #4856 and #4857

图3A. 胰岛素处理的HeLa细胞提取物的免疫印迹结果分析,梯度稀释#4858#4856抗体浓度,起始浓度为1μg/ml。两个抗体都得到了干净而特异的信号。然而,#4858得到的信号强了许多。5秒钟曝光结果显示,#4858在浓度为1ng/ml得到的信号很强,而相同浓度的#4856得到的信号就弱很多。

图3B. .免疫印迹分析梯度稀释的胰岛素处理的HeLa细胞(100 nM,10分钟)提取物,用CST的#4858#4856#4857 1:1000稀释后检测。#4858得到的信号仍然最强。

Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded colon carcinoma.

图4. 使用一定浓度的#4858#4857(80ng/ml)对石蜡包埋的大肠癌标本进行免疫组化分析。尽管两个抗体都得到了特异的信号,但是#4858得到了明显更强的信号。

Confocal immunofluorescent analysis of C6 cells, LY294002, U0126.

图5A. C6细胞的共聚焦免疫荧光结果分析,上图是用LY294002 #9901U0126 #9903和rapamycin处理2小时后的,下图是用胰岛素处理(100nM,30分钟)后的,使用的抗体是#4858(左列)和#4856(右列)。肌动蛋白微丝用Alexa Fluor® 555鬼笔环肽(红色)标记。蓝色伪彩= DRAQ5® #4084(DNA荧光染料)。在最佳浓度(0.25 μg/ml)时,#4858得到更强的信号。图5B展示的是定量信息。

图5B. #4858#4856的免疫荧光梯度稀释结果分析。两个抗体的最佳浓度都是0.25 μg/ml。这个浓度下的#4858信号强度是#4856的两倍,说明#4858具有更强的灵敏度。

Side by side immunofluorescent titration analysis.
 
Flow cytometric titration analysis of Jurkat cells

图6A. Jurkat细胞的流式细胞术结果分析,灰色区域表示的是未处理的细胞,空白区域表示的用LY294002 #9901wortmannin #9951U0126 #9903处理的细胞,左图使用的是最佳浓度(0.25μg/ml)的#4858,右图使用的是最佳浓度(0.5μg/ml)的#4856

图6B. #4858#4856梯度稀释的免疫荧光结果分析。#4858#4856各自的最佳浓度为0.25μg/ml和0.5μg/ml。在这些浓度下#4858的信号强度是#4856的两倍。而且#4858相比对照的诱导值也几乎是#4856的两倍(没有表示出来)。这些结果表明#4858在流式细胞术方面比#4856具有更好的灵敏度。

Flow cytometric analysis of Jurkat cells.

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