Cell Signaling Technology

免疫印迹抗体的验证

 

免疫印迹仍然是最常见的监测细胞或组织蛋白表达水平的科学方法之一。免疫印迹结果的准确性在很大程度上依赖于实验中所使用一抗的质量。Cell Signaling Technology (CST)提供用于免疫印迹的最高质量的一抗和二抗。所有CST™抗体均为CST自己生产,并根据严格的操作步骤进行了最广泛的验证。

观看用于免疫印迹实验抗体的验证过程

验证步骤包括:

  • 检测已知蛋白表达水平的几个细胞系和/或组织,快速确定种属间交叉反应性,验证特异性。
  • 使用生长因子,化学激活剂或抑制剂处理细胞系,从而诱发或抑制目标蛋白的表达,验证特异性。磷酸酶处理确认磷酸化特异性。
  • 使用siRNA转染或基因敲除细胞系,验证靶特异性。
  • 平行比较各批次,确保批次间的一致性。
  • 预定了最佳的稀释浓度和缓冲液,指定了阳性和阴性的细胞提取物对照,优化的详细的操作步骤,从而节省了宝贵的时间和试剂。

siRNA 基因敲除

siRNA transfection or knockout with Bcl-xL #6362 and #6363.

免疫印迹分析Hela细胞裂解物,转染 100 nMSignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-), SignalSilence® BcL-xL siRNA I #6362 (+) 或 SignalSilence® Bcl-xL siRNA II #6363 (+),使用的抗体是 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb #2764 (上图) 或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 (下图)。当α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 作为对照,Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 证实Bcl-xL的表达被相应的siRNA沉默。

磷酸酶和激活剂处理

Western blot analysis of extracts from 293, NIH/3T3, and C6 cells.

免疫印迹分析来自293,NIH/3T3 和 C6 细胞的裂解物,使用 λ-磷酸酶或 TPA #4174处理如图,使用的抗体是 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 (上图),或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695(下图).

多种细胞系的分析

Analysis of Multiple Cell Lines with JIP4/SPAG9 (D72F4) XP Rabbit mAb #5519.

免疫印迹分析多个来自组织和细胞的裂解物,使用的抗体是JIP4/SPAG9 (D72F4) XP® Rabbit mAb #5519.

批次测试

Side-by-side comparison of lots for Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP Rabbit mAb #9145.

免疫印迹分析Hela细胞,未经过IFN-α处理或经过IFN-α处理,比较Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145的Lot1,Lot2,Lot3和Lot8。注意:批次间的信号保持高度一致。(推荐的免疫印迹稀释浓度从Lot3开始,改为了1:2000)

实验优化

Optimal dilutions and buffers are predetermined for Western blot analysis.

免疫印迹分析 EGF Receptor Control Cell Extracts #5634 ,使用的抗体是 Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb #3777 (上图) 和 EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb #4267 (下图)

 

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