Cell Signaling Technology

免疫组化抗体的验证

免疫组化(IHC)是使用特异性一抗标记组织或细胞内蛋白,并使用IHC检测试剂显示目标蛋白的方法。Cell Signaling Technology(CST)提供超过500种已验证可用于IHC的抗体,并提供IHC稀释液,检测试剂,对照等相关产品,以确保您的IHC研究获得精确的结果。在免疫组化分析中确定抗体特异性需要很多验证步骤。CST科学家使用了各种方法,用于每支抗体的IHC实验验证,以证明抗体的染色结果是特异的和可信的。

验证步骤包括:

  • 进行Western blot分析证明特异性条带的实际分子量是否与理论分子量相符,确保最小的交叉反应条带。
  • 石蜡包埋的已知目标蛋白表达水平的细胞沉淀被用于验证特异性。
  • 抗体性能在有关的癌症小鼠模型上进行评估。
  • 从已知目标蛋白表达水平的细胞株产生的异种移植物有助于验证特异性。
  • 人类癌组织芯片被用来阐明抗体在很多组织类型上的性能表现。
  • 在适当的时候进行新鲜冰冻组织染色。
  • 用磷酸酶处理组织切片和细胞沉淀,以验证磷酸化特异性。
  • 使用阻断肽验证特异性,以排除Fc介导的结合,生物素引起的背景,以及其他非特异性染色。
  • 彻底的批次测试,确保准确的IHC结果的可重复性。
  • 稀释浓度和操作步骤已经预定,并且是特异的;并提供对照试剂。

细胞颗粒

Paraffin-embedded cell pellets are subjected to activator or inhibitor treatments.

 

Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691: 免疫组化分析SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101,使用的抗体是#4060 (上图) 或 #4691 (下图)。

 

小鼠模型

IHC analysis of paraffin-embedded WT and PTEN mouse prostate using #4060.

 

Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060: 免疫组化分析小鼠前列腺石蜡包埋野生型(左图)和PTEN (-/-) (右图),使用的抗体是 #4060。组织由怀特黑德生物医学研究所的Dr. David Guertin友情提供。

 

异种移植和磷酸酶处理

IHC analysis of paraffin-embedded HCC827 xenograft.

Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (D7A5) XP® Rabbit mAb #3777: 石蜡包埋的HCC827异种移植物的免疫组化分析,对照(上图)或经λ磷酸酶处理的(下图),使用的抗体是#3777

阻断肽

IHC analysis of paraffin-embedded human tonsil epithelium using #2005.

 

FoxP1 Antibody #2005:石蜡包埋的人扁桃体上皮细胞的免疫组化分析,使用对照肽(上图)或抗原特异性肽(下图),使用的抗体是#2005

 
 

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