Cell Signaling Technology

流式实验抗体的验证

流式细胞仪是灵敏的,可量化的,快速和多参数的,可以快速分析大量的细胞蛋白表达,DNA含量,细胞周期状态,细胞大小,光散射特性和离子的变化,即使是在非常小的亚群。此外,现代的流式细胞仪可以同时测量五个或更多的荧光标记物的强度,当细胞的数量有限时,这就变得很重要。结合流式细胞仪与CST提供的最优质的总蛋白和活化状态的特异性抗体,可以检测细胞株,分离组织,抽吸或血液标本中复杂的信号通路。我们拥有超过550种经验证的用于流式细胞术的抗体,包括荧光标记抗体,已经过筛选,以确定最佳的稀释浓度和验证特异性。

验证步骤包括:

  • 连续稀释用来确定最佳稀释浓度。

  • 与同型对照比较信号,用于估计一抗的非特异性结合。

  • 使用已知的阳性和阴性细胞系,验证特异性。

  • 使用特定通路的抑制剂或激活剂处理细胞系,验证特异性。

  • 使用封闭肽,siRNA,表达载体验证染色特异性。

  • 磷酸酶处理确认磷酸化抗体的特异性。

  • 广泛的质量控制测试保证批次间稳定性,消除批次间的变化。

  • 优化操作步骤,预定稀释浓度。

滴定

Titration of BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292.

BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292: 流式分析Jurkat细胞,采用连续稀释#5292,未掺入BrdU(红色)或BrdU掺入30分钟后(蓝色),比较二者的荧光强度。提高的倍数用绿色显示。因此,#5292的最佳浓度被确定为0.044微克/毫升。

同型对照

Isotype Control Example for #3900.

Rabbit (DA1E) mAb IgG XP®Isotype Control #3900: 流式分析SH-SY5Y细胞,使用CREB (D76D11) Rabbit mAb Antibody #4820 (蓝色),与同型对照抗体#3900(红色)进行比较。

验证活化状态抗体的特异性

Activation-state Specificity Example for #4324.

Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4324: 流式分析人全血细胞,使用#4324分析,未经过Human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF) #8930处理(红色)或经过处理(蓝色)。 

抑制剂处理

Inhibitor Treatment Example for #4344.

Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP®Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4344: 使用#4344流式分析经过U0126 #9903处理的Jurkat细胞(蓝色)或用TPA #4174处理的Jurkat细胞(绿色)。

阴性和阳性的细胞系

Positive and Negative Cell Lines Examples for #2707.

Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #2707: (A)流式细胞仪分析Ramos B (蓝色) 和Jurkat T (绿色)细胞,所用的抗体为#2707。(B)双色流式细胞仪分析T细胞和B细胞的混合液(分别为Jurkat和Ramos)。所用抗体为Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 和CD3 antibody。CD3 阴性 B 细胞具有很少或者没有Zap-70 蛋白染色, CD3 阳性的T 细胞有很强的Zap-70蛋白信号。

 

 

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