Cell Signaling Technology

酶联免疫吸附试验(ELISA)多肽检测方法

酶联免疫吸附试验(ELISA)多肽检测方法

A.     所需溶液和试剂

  1. 碳酸盐缓冲液:15 mM Na2CO3,35 mM NaHCO3,0.2 g/L NaN3(pH 9.6)。用碳酸盐缓冲液配制1 μM的合成多肽溶液。
  2. 10X磷酸盐缓冲液(10X PBS):在800 ml蒸馏水中加入80 g 氯化钠(NaCl),2 g 氯化钾(KCl),14.4 g 磷酸氢二钠(Na2HPO4),2.4 g 磷酸二氢钾(KH2PO4)。调节pH到7.4,定容至1 L
  3. 漂洗液:含0.05% Tween-20的1X PBS (PBST)
  4. 封闭液:含10 mg/ml BSA的PBST溶液
  5. 抗体稀释液:含3% BSA的PBST溶液
  6. DELFIA® Europium标记的抗小鼠IgG(针对小鼠源一抗)或抗兔IgG (PerkinElmer Life Sciences #AD0124)(针对兔源一抗)。
  7. DELFIA®信号增强溶液(PerkinElmer Life Sciences #1244-105)(“DELFIA®”是PerkinElmer公司的注册商标)

B.      操作方法

  1. 用100 μl 1 μM的多肽碳酸盐溶液包被96微孔板,加入溶液后4°C孵育过夜或37°C孵育2-6小时。如果多肽未能结合或吸附上去,则用pH在4-8之间的其他缓冲液尝试。
  2. 用漂洗液洗三次,每次每孔用200 μl漂洗液。
  3. 每孔加入200 μl封闭液,37°C封闭1小时。漂洗液洗板三次,每次每孔用200 μl漂洗液(晾干的板可以在4°C存放1-2个月,不影响使用)。
  4. 用抗体稀释液将一抗稀释到合适的浓度。各孔加入100 μl,37°C孵育1小时。
  5. 用漂洗液洗三次,每次每孔用200 μl漂洗液。
  6. 将DELFIA Europium标记的抗小鼠IgG稀释成67 ng/100 μl,各孔加入100 μl。37°C孵育半小时。
  7. 用漂洗液洗五次,每次每孔用200 μl漂洗液。
  8. 加入100 μl信号增强溶液,37°C孵育15分钟。利用适当型号的读板仪在615 nm处测定吸光度。

 

技术服务 

 

 

 

learn new product