Cell Signaling Technology

Western Blot Reprobing 实验方法

Western Blot Reprobing 实验方法

Western印迹实验后在同一张膜上检测其他蛋白的方法

A.      所需溶液和试剂

注意:所有溶液用Milli-Q或相当级别的水配制。

  1. 漂洗液: 1X TBS, 0.1% Tween-20 (TBS/T)
  2. 抗体去除液:配制100ml时,取0.76 g Tris碱,2g SDS和700μl β-巯基乙醇,加蒸馏水至100ml。用盐酸调整pH到6.8。

B.      操作步骤:

  1. 曝光显影结束以后,把膜用TBS/T清洗4次,每次5分钟。如果膜从没有被晾干,所能够得到的结果是最好的。
  2. 将膜浸泡在抗体去除液中,50°C孵育30分钟并轻轻搅动。
  3. 把膜用TBS/T清洗6次,每次5分钟
  4. (可选)为确认原有的信号已经消失了,将膜用10 ml TBS/T清洗2次,每次5分钟。在膜上滴加1X LumiGLO®溶液中,室温下孵育1分钟并轻轻晃动。将膜取出并吸走多余的反应底物(但不要使它晾干),包在保鲜膜中然后压上x-光片曝光。
  5. 将膜用TBS/T清洗4次,每次5分钟
  6. 现在印迹膜又可以重新使用了。继续”Western 免疫印迹方法”中的”膜封闭和抗体孵育”步骤开始新一轮的检测。

 

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