Cell Signaling Technology

PTMScan® 翻译后修饰的蛋白质组学

摘要

PTMScan® 技术 — 鉴定和量化蛋白质翻译后修饰水平变化的蛋白质组学方法

Jeffrey C. Silva, Charles L. Farnsworth, Xiaoying Jia, Matthew P. Stokes, Albrecht Moritz, Ailan Guo, Roberto D. Polakiewicz, Michael J. Comb, 位点发现组和PhosphoScan服务组,Cell Signaling Technology, Inc.

Cell Signaling Technology (CST) 公司的PTMScan®技术联合专有的基于抗体的肽段富集方法与液相色谱 - 串联质谱(LC-MS/MS),对翻译后修饰(PTMs),如磷酸化(PhosphoScan®)泛素(UbiScan®)和乙酰化(AcetylScan®)等进行定量分析。

PTMScan® 技术采用CST ™的特定模式抗体(Motif antibody),在消化的细胞提取物中,将翻译后修饰发生改变的多肽从修饰未改变的多肽中分离出来。该免疫亲和纯化技术,结合LC-MS/MS分析,确定和量化修饰多肽的丰度。 Motif抗体可以特异性的结合磷酸化(酪氨酸,丝氨酸,苏氨酸)的多肽,乙酰化的多肽,或泛素化标记的多肽,从而可以对细胞的磷酸化,乙酰化,或泛素化状态进行定量分析。

MAPK,mTOR和PI3K/Akt通路是激活下游致癌受体酪氨酸激酶RTK的关键信号通路。所有这些途径激活AGC激酶家族成员,包括Akt,RSK,和P70 S6激酶,从而将这些蛋白底物的RxRxxS / T序列磷酸化。

在最近CST科学家撰写的磷酸化组学研究中 (Sci. Signal. (2010) 24;3(136):ra64),在表皮生长因子受体(EGFR),c-Met,血小板衍生生长因子受体(PDGFR)驱动的三种细胞系中,鉴定了这些AGC家族激酶300多种推测的底物。实验方法采用PhosphoScan®技术,使用RxRxxS / T模式抗体作为亲和试剂选择性免疫沉淀Akt,RSK,和P70 S6激酶的磷酸化底物。使用癌症靶向性药物PI3K,mTOR,和MEK抑制剂进行研究可以绘制下游RTK激酶的信号网络。底物包括多种蛋白,功能广泛,包括脚手架,蛋白质稳定性,代谢,运输和运动能力。

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