Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
42779S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 猴
使用与人源 HIF-1α 蛋白的 Lys478 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
低氧诱导因子 1 (HIF1) 是在细胞对缺氧的反应中发挥至关重要作用的异二聚转录因子 (1)。HIF1 复合体由作为 PAS(Per、ARNT、Sim)家族碱性螺旋-环-螺旋蛋白的两个亚基 HIF-1α 和 HIF-1β 组成 (2)。HIF1 调节诸多基因类型转录,这些基因可促进低氧环境的反应,包括调节血管生成、红细胞生成、细胞周期、代谢和凋亡的基因。广泛表达的 HIF-1α 一般在常氧细胞中可通过泛素/蛋白酶体通路快速降解。在常氧条件下,HIF-1α 会发生脯氨酸羟基化,这会导致能够促进与希佩尔-林道 (VHL) 蛋白 E3 连接酶复合体结合的构象变化;随后发生泛素化和蛋白酶体降解 (3,4)。低氧条件和羟化酶化学抑制剂(如去铁敏和钴)均可抑制 HIF-1α 降解并且导致其稳定。此外,HIF-1α 可按不依赖于氧的方式,由各种细胞因子,经 PI3K-AKT-mTOR 通路诱导 (5-7)。
HIF-1β 也称作 AhR 胞核易位蛋白 (ARNT),原因在于其具有与芳基烃受体 (AhR) 匹配以形成异二聚转录因子复合体的能力 (8)。HIF-1β 与 AhR 均可在生物异源物质代谢中发挥重要作用 (8)。此外,导致 TEL-ARNT 融合蛋白的染色体易位与急性成髓细胞性白血病相关 (9)。研究还表明,ARNT/HIF-1β 表达水平在2 型糖尿病患者的胰岛中显著下降,这表明 HIF-1β 在胰腺 β-细胞功能中发挥重要作用 (10)。
探索与本品相关的通路。
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