REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人 p130 Cas 蛋白的 SH3 结构域中 Leu116 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
p130 Cas (CrK 相关底物)是一种包含多个蛋白间互作结构域的停靠蛋白。氨基末端 SH3 结构域可作为一个调节 CAS 酪氨酸磷酸化的分子开关,因为它会与黏着斑激酶 (FAK) (1) 和 FAK 相关激酶 PYK2 (2) 以及酪氨酸磷酸酶 PTP-1B (3) 和 PTP-PEST (4) 相互作用。羧基末端 Src 结合域 (SBD) 包括一个可介导与 Src 家族激酶 (SFK) SH3 结构域之间相互作用的脯氨酸富集基序,和一个能促进与 SFK SH2 结构域相互作用的酪氨酸磷酸化位点(Tyr668 和/或 Tyr670)(5)。p130 Cas 中央底物结构域(酪氨酸磷酸化的主要区域)的特征是在 Tyr-X-X-Pro (YXXP) 基序有 15 个酪氨酸(包括 Tyr165、249 和 410)。磷酸化后,多数 YXXP 基序可作为带有 SH2 或 PTB 结构域蛋白的锚定位点,包括接头蛋白、C-Crk、Nck 以及肌醇 5’-磷酸酶 2 (SHIP2) (6)。p130 Cas 的酪氨酸磷酸化是整合素调控正常细胞行为(包括运动、增殖和存活)中的一个关键信号转导步骤。异常 Cas 酪氨酸磷酸化可能会通过某些肿瘤蛋白诱导细胞转化 (5)。
探索与本品相关的通路。
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