Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
41475S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与 Lys119 位点被单泛素化的人组蛋白 H2A 的羧基末端周围残基相对应的合成肽,,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
核小体由四个核心组蛋白(H2A、H2B、H3 和 H4)组成,是染色质的主要组成部分。最初被认为可作为 DNA 包装的静态支架的组蛋白现在已被证明是动态蛋白,可进行多种类型的翻译后修饰,包括乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化 (1)。泛素是一种保守的 76 氨基酸肽单元,能通过泛素化过程共价连接多个细胞蛋白。这个蛋白-泛素接合过程涉及三种组分。首先,泛素通过与激活组分 E1 形成一种硫酯复合体而被激活;激活的泛素继而转运到泛素载体蛋白 E2,然后从 E2 转运到泛素连接酶 E3,最后从 E3 转运到靶标蛋白赖氨酸残基的 ε-NH2 (2)。组蛋白 H2A 在 Lys119 位点被多梳阻遏蛋白复合体 1 (PRC1) 单泛素化,它对发育性 HOX 基因的转录沉默和 X 染色体失活十分关键 (3-6)。PRC1 由 Bmi1 和 RING1A(又称 RING1 或 RNF1)组成,这两种组分能增强催化亚基 RING1B(又称 RING2 或 RNF2)的 E3 泛素连接酶活性 (3,4)。组蛋白 H2A 还在 DNA 损伤的 Lys119 位点被单泛素化。除了另一种 E3 泛素连接酶 RNF8,这种单泛素化活动需要 PRC1 组分 Bmi1 和 RING1B,并且通过结合 RAP80/UIMC1(包含 1 个蛋白的泛素互作基序)促进随后的 BRCA1 复合体募集 (7-10)。
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