Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
13186S | 100 µl |
REACTIVITY | M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | 18 |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Western Blotting | 1:1000 |
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:100 |
For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.
NOTE: Please refer to primary antibody product webpage for recommended antibody dilution.
From sample preparation to detection, the reagents you need for your Western Blot are now in one convenient kit: #12957 Western Blotting Application Solutions Kit
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
Load 20 µl onto SDS-PAGE gel (10 cm x 10 cm).
NOTE: Loading of prestained molecular weight markers (#59329, 10 µl/lane) to verify electrotransfer and biotinylated protein ladder (#7727, 10 µl/lane) to determine molecular weights are recommended.
NOTE: Volumes are for 10 cm x 10 cm (100 cm2) of membrane; for different sized membranes, adjust volumes accordingly.
* Avoid repeated exposure to skin.
posted June 2005
revised June 2020
Protocol Id: 10
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:404
小鼠
大鼠
使用与小鼠 IL-17F 蛋白 Ser93 周围残基相对应的合成肽使动物免疫便可产生单克隆抗体。
IL-17(白细胞介素-17)家族由 cytokines IL-17A-F 和它们的受体(包括 IL-17RA-RE)组成 (1)。IL-17 cytokines 可由多种细胞类型产生,包括 CD4+ T 细胞的 Th17 亚型、γδ T 细胞的亚型、NK 细胞和 NKT 细胞 (2)。在对大多数 IL-17 细胞因子充分研究情况下, IL-17A 和 IL-17F 可通过诱导促炎 细胞因子、趋化因子和抗微生物肽的表达实现真菌和细菌免疫 (2)。另外,IL-17A 与一些自身免疫病的发病有关 (3)。IL-17E 能促进 Th2 细胞应答 (4)。IL-17B、IL-17C 和 IL-17D 的作用还不是很清楚,但是这些家族成员也具有诱导促炎 cytokines 的能力 (1,5,6)。IL-17 受体有一个胞外域、一个跨膜域和一个 SEFIR 域。据悉,它们通过 SEFIR 结构域来募集 SEFIR 结构域所含有的结合体 Act1,作为同源二聚体、异源二聚体或多聚体进行信号转导 (7)。与大多数 cytokines 通过 Jak/STAT 通路传递信号不同,IL-17 引起的信号转导会激活 NF-κB (8)。
IL-17F 是一种半胱氨酸促炎性细胞因子,可与自体形成二聚体或和其有 50% 同源性的 IL-17 家族成员 IL-17A 形成异二聚体 (9)。尽管 IL-17F 的表达主要是由 Th17 细胞生成,但它却已在几个细胞类型中发现 ,包括已激活的 CD8+ T 细胞、γδ T 细胞、NKT 细胞、B 细胞和 LTi 细胞。IL-17F 可与含有 IL-17RA 和 IL-17RC 的异二聚体受体结合,结合之后将诱发 TRAF6 介导的 TAK 和 Erk1/2 MAP 激酶通路的激活(10)。这将诱发许多炎性趋化因子和 细胞因子表达,其中包括 IL-1β、IL-6、IL-8 和 MIP-1β,同时人体呼吸道上皮细胞、内皮细胞和纤维母细胞中的粘附因子表达水平也会提高 (11)。IL-17F 与哮喘和其他自身免疫疾病相关,包括类风湿性关节炎、多发性硬化、牛皮癣以及炎症性肠道疾病等(12)。
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