REACTIVITY | H |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人
使用人重组 IFN-γ 蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
IFN-γ 在先天和适应性免疫应答中发挥关键作用。IFN-γ 会激活先天免疫细胞的细胞毒活性,如巨噬细胞和自然杀伤细胞 (1,2)。自然杀伤细胞和抗原呈递细胞 (APC) 产生的 IFN-γ 会诱导 T 淋巴细胞产生 IFN-γ,增加 I 类和 II 类 MHC 表达,增强肽抗原呈递,从而促进细胞介导的适应性免疫 (1)。Due to differences in the degree of glycosylation, there are three forms of IFN-γ, with approximate molecular weights of 25, 20, and 15.5 kDa by SDS-PAGE (5). IFN-γ 的抗病毒活性通过诱导 PKR 和其他调节分子产生。IFN-γ 结合 IFNGR1/IFNGR2 复合体会促进受体复合体二聚化,形成 (IFNGR1/IFNGR2)2 -IFN-γ 二聚体。这种结合会诱导受体胞内域发生构象变化,而信号转导则会涉及 Jak1、Jak2 和 Stat1 (3)。IFN-γ 在免疫监视和功能扩增中的关键作用由以下方面支持:IFN-γ 或 IFNGR 敲除小鼠以及 IFNGR1 或 IFNGR2 突变失活人中的病原体感染易感性增强。IFN-γ 还与动脉粥样硬化有关 (4)。
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