Cell Signaling Technology

体验全球顶尖实验室的Western Blot!

 

 

Western Blotting 实验操作步骤及技巧

电影1:讲述并演示Western Blot的关键实验操作步骤和注意事项,从样本制备直至检测显影,做好每一步!

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Western Blotting 问题诊断及对策

电影2:总结、归纳Western实验的常见问题,发现问题并提出对策,步步为赢!

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免疫印迹是一项广泛使用的技术,用以检测细胞和组织提取物中的蛋白含量。该技术通过抗体结合到目的蛋白来检测生物样本的蛋白含量。抗体与其靶蛋白抗原表位的精确结合确保该技术可以检测蛋白内的高度特异性氨基酸序列。 在CST实验室,科学家每天做上千次免疫印迹验证我们现有的和新的抗体。因为一抗是影响数据质量的关键试剂。质量差的一抗,会导致背景很杂、难以解释的或误导性的结果。

我们已经优化了十多年的免疫印迹操作方法,保证让你可以重复操作,并得到可以重复的、可靠的结果。 使用CST科学家常用的对照和配套试剂,您也会获得最佳的实验结果。

题目:Western Blot 操作步骤详解及问题诊断与对策

主讲人:Cell Signaling Technology(CST)中国资深技术支持团队

正在限时预约中,请抓紧时间预报名……

Cell Signaling Technology(CST)中国资深技术支持团队非常乐意亲临您指定的现场进行技术讲座。讲座内容包括“Western blot 操作步骤详解及问题诊断与对策”但不限于此,如您有技术讲座的需要,请邮件到  cstsignalingcare@cst-c.com.cn进行预约。收到邮件后,技术支持团队会及时和您联系,以确定更多细节。

 

拥有实验材料,没有科研思路,需要高人点拨? 有了科研思路,困于实验设计,需要能人建议? 实验如火如荼,伤于屡战屡败,需要熟手指点? CST博士互助论坛,为您排忧解难!
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验证:抗体的稀释比例经过优化。产品数据来自对 多种实验参数 的广泛检测。.

对照: :我们推荐您使用 阳性和阴性细胞裂解液对照 ,以检测抗体表现和优化实验条件。

实验步骤::我们提供详细的操作步骤,因此您可以快速开始实验,减少时间和试剂的浪费。

辅助产品: 我们提供经过实验步骤验证的辅助产品,可帮助您更好地完成实验。

技术支持:我们的资深技术支持科学家尽在咫尺,是您实验工作的好伙伴。


Western Blot Analysis of Akt products

Akt 免疫印迹示例

多个细胞系提取物的免疫印迹结果,使用抗体Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060 (左) 和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (右)分析未经处理细胞系,以及经LY294002 #9901 (一种PI3K抑制剂),Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917 (通过IGFIR结合刺激Akt),或Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913 (通过受体结合诱导PI3K/Akt通路)处理的细胞系。

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免疫沉淀

免疫沉淀(IP)是用特异性抗体从异质细胞或组织提取物中富集特定蛋白的技术。免疫共沉淀(co-IP)是将紧密的蛋白复合体拉下来的技术。IP和co-IP是广泛使用的有用技术,以识别蛋白与蛋白的相互作用和蛋白复合体的组成成员。

CST提供经详细操作步骤验证的高质量抗体用于IP和co-IP实验。高度特异的抗体,连同经过全面验证的 辅助产品 包括IP 磁珠和缓冲液,保证得到可靠的IP和co-IP数据以阐述蛋白-蛋白相互作用和蛋白复合体的组成。为了节约时间和试剂,CST提供 琼脂糖或磁珠 偶联的抗体,以进行直接的IP和co-IP实验。

CST提供定制服务:在抗体上偶联琼脂糖或磁珠——请联系我们 –  (info@cst-c.com.cn) 获得更多信息。

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免疫沉淀数据

Immunoprecipitation Gel Data

图A.免疫沉淀PC-3细胞提取物中的Neuropilin-1,其中泳道2未加一抗,泳道3使用的抗体是Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725 lot 1 (lane 3), or Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725  lot 1,泳道4使用的抗体是 Neuropilin-1 (D62C6) Rabbit mAb #3725  lot 2进行免疫印迹分析。

图B. 免疫沉淀小鼠脑组织提取物中的α-Synuclein,其中泳道2未加一抗,泳道3使用的抗体是α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 lot 1,泳道4使用的抗体是 α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 lot 2。泳道1只有10%的Input。使用α-Synuclein (D37A6) XP® Rabbit mAb #4179 lot 2进行免疫印迹分析。使用二抗Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678进行免疫印迹分析,避免了与兔IgG的重链和轻链发生反应。

图C.免疫沉淀经Etoposide #2200 (25 µM,5 小时)处理的Jurkat细胞提取物中的caspase-3,泳道2使用的抗体是Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道3使用的抗体是Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 lot 3,泳道4使用的抗体是Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 lot 6。泳道1只有10%的Input。使用Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb #9665 lot 6进行免疫印迹分析。使用二抗Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678进行免疫印迹分析,避免了与兔IgG的重链和轻链发生反应。

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免疫共沉淀数据

Co-Immunoprecipitation Gel Data

使用针对复合体多个组分(包括GβL,mTOR 和 Raptor)的抗体免疫共沉淀mTORC1复合体。所有数据来自Hela细胞提取物,使用的抗体如图所示。泳道1只有10%的Input,泳道2是免疫共沉淀后的免疫印迹结果。.

图AIP Pull-down: GβL (86B8) Rabbit mAb #3274Western Probe: mTOR Antibody #2972

图BIP Pull-down: mTOR Antibody #2972Western Probe: Raptor (24C12) Rabbit mAb #2280

图CIP Pull-down: Raptor (24C12) Rabbit mAb #2280Western Probe: GβL (86B8) Rabbit mAb #3274

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