Cell Signaling Technology

In-Cell Western™ (LI-COR® )

In-Cell Western™是一个简单而又经济的定量整个细胞内信号的方法。这个分析包含在微量滴定板上接种细胞,接着固定/透化,随后用特定状态的激活状态或对照抗体,红外线二抗,和/或远红外的DNA染料来标记。可精确测量信号诱导或抑制后每孔的数据,通过LI-COR® Odyssey®红外成像系统获得,具有在每个培养皿上进行多重处理、终点和复制的潜力。

PhosphoPlus® In-Cell Duets

PhosphoPlus® In-Cell Duet Kits 可独立测量和标准化磷酸化蛋白的水平。

In-Cell Western Graph #7255 In-Cell Western MDA #7255

 

MDA-MB-468 细胞用不同浓度的LY294002 (PI3 Kinase Inhibitor) #9901处理2小时,接着用hEGF #8916刺激20分钟后的结果分析。用PhosphoPlus® Akt (Ser473) In-Cell Duet (ICW Compatible) #7255同时检测Akt的磷酸化状态和总蛋白表达水平。随着LY294002浓度的升高,Akt的磷酸化信号相比hEGF刺激的对照急剧下降(约3倍),而Akt总蛋白水平保持不变并用来统一校正数据。当用Akt的磷酸化作为检测指标,这个化合物的IC50为2.7μM。数据和图像都可以从LI-COR® Biosciences Odyssey®红外成像系统中得到。

PathScan® Multi-Target HCA Kits

PathScan® Multi-Target HCA Kits让使用者能够分析某个通路或生物学过程相关的八个信号分子。

7103 Well Schematic

 

PathScan® Multi-Target HCA Stress and Apoptosis Kit #7103的96孔板布局示意图。在这张图中,培养板上的每3列代表一种处理,共有四种处理,96孔板的每一行使用一种抗体,共八种。这种布局可让研究者监控96孔板中细胞应激和凋亡通路的信号。上图是一个例子;使用者可以根据自己的需要重新设计。

7103 Graph

未处理的(蓝色)或用25 μg/ml的茴香霉素处理(红色)或用1 μM十字孢碱处理(绿色)的A549细胞。平均荧光强度用PathScan® Multi-Target HCA Stress and Apoptosis Kit #7103测量。在Acumen® HCS平台上生成数据。

ICW-验证抗体

大量 Cell Signaling Technology (CST)抗体经过验证可用于In-Cell Western™(ICW)分析。因为ICW分析与传统的免疫细胞化学相似,验证过并被批准用于免疫荧光细胞化学(IF-IC)的抗体可与此分析兼容。这些抗体可在CST网站和目录的应用领域找到。LI-COR® 平台能否成功检测来自抗体的信号,依赖于蛋白质的表达水平,而这通常是细胞系和处理特异的。如您在分析设计和抗体选择过程中如需帮助,请联系ICW@cellsignal.com

ICW 试剂

DyLight®偶联二抗

我们提供secondary antibodies conjugated to DyLight® 680 or 800近红外荧光染料。因为DyLight®染料具有低背景荧光,高灵敏度,耐光性,容易定量,所以它们是荧光免疫印迹和In-Cell Western™ (ICW)分析的理想产品。每个DyLight®偶联二抗都由荧光免疫和ICW分析测试过。

DRAQ5

我们也提供DRAQ5®,一种近远外DNA染料。这种染料可用于根据细胞数调整抗体信号,消除潜在的结合干扰,这种干扰可能发生在未广泛检测活化状态和总蛋白抗体的兼容性时。

 

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